利用RT-LAMP方法快速检测飞虱体内南方水稻黑条矮缩病毒

本发明涉及飞虱体内南方水稻黑条矮缩病毒的快速检测技术及其在病害诊断和测报上的应用，属于农业科学技术领域。

提供了一种快速检测飞虱体内南方水稻黑条矮缩病毒的方法，通过该方法可以快速诊断出飞虱是否携带南方水稻黑条矮缩病毒。

本发明所提供的一种快速检测飞虱体内南方水稻黑条矮缩病毒的方法，是通过以下方法获得的： 1)根据NCBI已报道的南方水稻黑条矮缩病毒S9核苷酸序列，通过软件DNAstar分析后选择相对保守区域311-770bp，利用EU523359.1上的对应区域通过在线引物设计软件primerExplorer V4(http://primerexplorer.jp/elamp4.0.0/index.html)设计引物，其中包括2条外引物F3/B3和2条内引物FIP/BIP。； 2)Trizol reagent法提取植株总RNA； 3)设置不同内外引物浓度比例、Mg2+浓度，确定最佳反应体系；分别改变反应时间和温度进行RT-LAMP扩增反应，确定最佳反应条件。 4)在最佳反应体系、条件下，以水稻黑条矮缩病毒为对照验证这一方法的特异性； 5)与RT-PCR方法进行比较，验证RT-LAMP的可靠性； 6)通过肉眼判断和SYBR GreenI染色对RT-LAMP产物进行可视化处理。 本发明提供的引物序列如下： F3 GCTAACTACGTTCGACAACC B3 ACAGAGGAAGCAAAGACATT FIP GCTTTCAACGACAATTTTCAAAACG-GAACATCAGCATTAAATCTCCT BIP AAGATGATGAATCACAGAGACCCA-ACAAACTTCTTTTCTTGCTCAT。

利用电泳检测或荧光染料方法可以排除水稻黑条矮缩病的干扰，快速诊断出飞虱是否携带南方水稻黑条矮缩病毒。 利用这一方法可以排除水稻黑条矮缩病的干扰，快速鉴定出飞虱体内是否携带南方水稻黑条矮缩病毒，进而采取针对性的防治策略，减少病害带来的损失。