一种利用纳米材料细胞传感器评价抗氧化多肽活性的方法

抗氧化多肽活性评价

如何快速检测多肽抗氧化活性

利用纳米材料细胞传感器评价抗氧化多肽活性的方法，纳米材料细胞传感器，包括裸金电极，以及固定在裸金电极上的纳米铂粒子、纳米银线和结肠癌细胞Caco-2， 所述纳米材料细胞传感器的制备方法，包括如下步骤： a)、纳米铂粒子的电镀：将打磨后的裸金电极置于8～12mM的H2PtCl6溶液中，在电压-0.3～-0.1V，扫描速率100～200mV/s的条件下电镀250～350s； b)、纳米银线的修饰：将纳米银线溶解在去离子水中，然后滴加到镀铂的电极上，经10～15min日光灯照射，使纳米银线固定在电极表面得到纳米修饰电极； c)、凝胶的制备：将海藻酸钠添加至浓度为1×的DMEM培养液中，添加量为0.01～0.02g/mL，超声处理4～6min，使海藻酸钠均匀分布在DMEM培养液中；再将氧化石墨烯溶液至均布了海藻酸钠的DMEM培养液中，添加量为1.20～1.30mg/mL，均匀搅拌后采用超声波处理25～35min除气泡混匀； d)、Caco-2细胞的培养：在37℃、CO2含量为5％的环境中，于含有体积浓度为8～13％的胎牛血清的DMEM培养基中培养结肠癌细胞Caco-2，培养5-6天，隔天换液； e)、细胞固定：将含有Caco-2细胞的DMEM悬浮液与凝胶按照1:1的体积比例混合，轻轻搅拌后吸取4～6μL滴加在纳米修饰电极的表面，接着将细胞电极浸没于CaCl2溶液中进行固定2～4min，制备得到纳米材料细胞传感器； 其特征在于， 包括如下步骤评价抗氧化多肽活性： 1)、纳米铂粒子的电镀：将打磨后的裸金电极置于8～12mM的H2PtCl6溶液中，在电压-0.3～-0.1V，扫描速率100～200mV/s的条件下电镀250～350s； 2)、纳米银线的修饰：将纳米银线溶解在去离子水中，然后滴加到镀铂的电极上，经10～15min日光灯照射，使纳米银线固定在电极表面得到纳米修饰电极； 3)、凝胶的制备：将海藻酸钠添加至浓度为1×的DMEM培养液中，添加量为0.01～0.02g/mL，超声处理4～6min，使海藻酸钠均匀分布在DMEM培养液中；再将氧化石墨烯溶液至均布了海藻酸钠的DMEM培养液中，添加量为1.20～1.30mg/mL，均匀搅拌后采用超声波处理25～35min除气泡混匀； 4)、Caco-2细胞的培养：在37℃、CO2含量为5％的环境中，于含有体积浓度为8～13％的胎牛血清的DMEM培养基中培养结肠癌细胞Caco-2，培养5～6天，隔天换液； 5)、细胞处理： 5.1)、空白对照组：细胞按照1×105接种至细胞板上，待细胞生长完全填充细胞板内底，用PBS清洗细胞2～3次，添加胰酶消化，收集细胞得到细胞悬浮液一； 5.2)、氧化损伤组：细胞按照1×105接种至细胞板上，待细胞生长完全填充细胞板内底，添加H2O2氧化损伤2～3h，然后用PBS清洗细胞2～3次，添加胰酶消化，收集细胞得到细胞悬浮液二； 5.3)、多肽处理组：细胞按照1×105接种至细胞板上，待细胞生长完全填充细胞板内底，添加溶解有多肽的DMEM溶液预处理10～12h后添加H2O2氧化损伤2～3h，然后用PBS清洗细胞2～3次，添加胰酶消化，收集细胞得到细胞悬浮液三； 6)、细胞固定：将细胞悬浮液一、细胞悬浮液二、细胞悬浮液三分别与凝胶按照1:1的体积比例混合，混匀后分别吸取4～6μL滴加在修饰电极一、修饰电极二、修饰电极三的表面得到细胞电极一、细胞电极二和细胞电极三，然后将细胞电极一、细胞电极二和细胞电极三分别浸没于CaCl2溶液中固定2～4min，最后置于5％CO2的37℃培养箱孵育3～6min，取出得到细胞传感器一、细胞传感器二和细胞传感器三； 7)、电化学检测：在含有1.0mM的Fe(CN)63-/4-溶液中分别对细胞传感器一、细胞传感器二和细胞传感器三进行电化学方法检测，记录电流信号并分别读取峰值电流记为I，Io，Ip； 8)、判断多肽是否具有抗氧化性： 8.1)、当Io＞I时，说明细胞传感器有效，进而进入步骤8.2)评价多肽的抗氧化性； 8.2)、当I≤Ip≤Io时，说明该多肽有抗氧化性，当Io≤Ip时，说明该多肽没有抗氧化性。

明显缩短试验的周期