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CN109456412B 一种猪流行性腹泻病毒基因工程疫苗及其制备方法
申请日：2018.04.10
IPC分类号：C07K19/00
公开日：20190903
申请人：扬州优邦生物药品有限公司
发明人：丁国伟;范娟;钱钟;叶正琴;潘杰;李玉和;宋庆庆
一种猪流行性腹泻病毒基因工程疫苗及其制备方法
兽用生物制品领域
如何预防猪流行性腹泻
一种用于预防猪流行性腹泻病的基因工程疫苗，含有氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示的抗原蛋白。
该疫苗具有高效、安全性好、抗体整齐度高、保护率高的优点。
申请号：CN201810313525.9
公开（公告）号：CN109456412B
申请日：2018.04.10
公开（公告）日：20190903
优先权：
同族：中国
同族引用文献：3
同族施引专利：8
申请人：扬州优邦生物药品有限公司
申请人地址：225008 江苏省扬州市维扬经济开发区金槐路7号
权利人：金宇优邦生物科技(江苏)有限公司
权利人地址：225008 江苏省扬州市维扬经济开发区金槐路7号
发明人：丁国伟;范娟;钱钟;叶正琴;潘杰;李玉和;宋庆庆
代理机构：哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司
代理人：张勇
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1.一种重组抗原蛋白，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
2.编码权利要求1所述重组抗原蛋白的基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。
3.一种用于预防猪流行性腹泻病的基因工程疫苗，其特征在于，含有权利要求1所述的重组抗原蛋白。
11.制备权利要求1所述重组抗原蛋白的方法，其特征在于，采用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达所述重组抗原蛋白，主要包括以下步骤：
(1)将编码猪流行性腹泻病毒S蛋白COE的基因插入到编码人乙肝核心抗原的基因中，插入的位置是编码第79位氨基酸和编码第80位氨基酸的核苷酸序列之间，构建融合基因片段HBcAg-PEDV-COE；所述编码人乙肝核心抗原的基因序列如SEQ ID NO.2所示，所述编码猪流行性腹泻病毒S蛋白COE的基因序列如SEQ ID NO.4所示；
(2)将融合基因片段与pFastBac I载体分别进行BamH I和HindI双酶切，并进行连接，连接产物转化E.coli DH5α；获得阳性质粒pFastBac I-HBcAg-PEDV-COE；
(3)以所述步骤(2)中获得的pFastBac I-HBcAg-PEDV-COE质粒转化E.coli DH10 Bac感受态细胞，通过转座，获得重组杆粒Bacmid-HBcAg-PEDV-COE；
(4)将所述步骤(3)中获得的重组杆粒Bacmid-HBcAg-PEDV-COE转染昆虫细胞sf9，获得重组杆状病毒rBac-HBcAg-PEDV-COE；
(5)培养所述步骤(4)中获得的重组杆状病毒rBac-HBcAg-PEDV-COE，收获上清，得到HBcAg-PEDV-COE重组蛋白。